兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品型號(hào)：

廠商性質(zhì)：經(jīng)銷商

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更新時(shí)間：2025-04-09

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產(chǎn)品名稱：兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞

組織來源：眼角膜組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔角膜內(nèi)皮分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。角膜的高度透明性和光學(xué)性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一，而角膜內(nèi)皮細(xì)胞（CEC）在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內(nèi)皮細(xì)胞是角膜內(nèi)層的單層細(xì)胞，構(gòu)成了后彈力層和房水之間的物理屏障，通過離子“泵"功能調(diào)節(jié)角膜中離子濃度和水分，維持角膜的半脫水狀態(tài)，保證角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能出現(xiàn)紊亂，常導(dǎo)致角膜水腫而使角膜部分甚至失去透明性。角膜內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能；②角膜內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)角膜透明性有重要作用；③角膜內(nèi)皮細(xì)胞通過Na+-K+-ATP酶活性，維持角膜和房水內(nèi)Na+梯度，防止水分滲入角膜內(nèi)，維持角膜實(shí)質(zhì)層相對(duì)脫水狀態(tài)，維持透明性。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔角膜內(nèi)皮采用混合膠原酶消化結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔角膜內(nèi)皮經(jīng)NSE（神經(jīng)元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a）、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

收到細(xì)胞如何處理？

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。

2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。

5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作

公司正在出售的產(chǎn)品：

線粒體呼吸鏈復(fù)合物II試劑盒（琥珀酸-輔酶Q還原酶）

蛋白質(zhì)羰基含量測(cè)定試劑盒（測(cè)血清、組織）（紫外比色法）

超微量Ca-ATP酶測(cè)定試劑盒

超微量Ca2+Mg2+-ATP酶測(cè)定試劑盒（比色法）

小鼠肺病毒(PVM)試劑盒

Human hirudin (Hirudin) ELISA Kit 人水蛭素(Hirudin)試劑盒

Human11-dehydro-thromboxaneB2,11-DH-TXB2ELISAKit 人11去輕血栓烷B2(11-DH-TXB2)試劑盒 進(jìn)口分裝

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植物葉綠體外膜脂質(zhì)薄層色譜(TLC)分析試劑盒10次

Huma-lymphoopicvirusⅠ,HTLV-ⅠELISAKit人類嗜T淋巴細(xì)胞Ⅰ型病毒(HTLV-Ⅰ)試劑盒

Ras樣蛋白家族10A抗體

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CD84 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD84 蛋白

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4(FGF4)重組蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 4 (FGF4)

FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Phe, His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated

IL21重組小鼠 IL21 / Interleukin 21 蛋白 Protein

CD84 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD84 蛋白

SIGLEC5重組人 SIGLEC5 蛋白 Protein

兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞大鼠利肽受體2(NPR2)試劑盒 ，英文名： NPR2 ELISA Kit

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CLIAKitforGAD-AbELISAKit大鼠谷脫羧酶自身抗體

細(xì)胞過氧化氫(HYDROGENPEROXIDE)活性比色法定量試劑盒20次

ratprolactin,PRLELISAKit大鼠催乳素(PRL)試劑盒