兔小腦顆粒細胞

產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品型號：

廠商性質(zhì)：經(jīng)銷商

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更新時間：2025-04-09

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產(chǎn)品名稱：兔小腦顆粒細胞

組織來源：腦

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含B-27、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：神經(jīng)元細胞樣

傳代特性：屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔小腦顆粒體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞簡介：

兔小腦顆粒分離自小腦皮層組織；神經(jīng)元是神經(jīng)系統(tǒng)基本的結(jié)構(gòu)與功能單位，小腦顆粒神經(jīng)元是體積較小的神經(jīng)元，直徑約10μm，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量非常豐富，近乎神經(jīng)元數(shù)量的一半。由于小腦神經(jīng)元的生長、分化和大腦皮層神經(jīng)元相似，而且數(shù)量多、便于取材，因此小腦顆粒神經(jīng)元是研究神經(jīng)元生長發(fā)育、神經(jīng)軸突再生及神經(jīng)疾病發(fā)生機制和臨床神經(jīng)藥理的重要手段。小腦顆粒神經(jīng)元是小腦主要的中間神經(jīng)元，在哺乳動物的小腦內(nèi)數(shù)量為豐富。顆粒神經(jīng)元的軸突與苔狀纖維和爬行纖維相聯(lián)系，形成小腦皮層內(nèi)的神經(jīng)元環(huán)路，在小腦的神經(jīng)活動中起著非常重要的作用。在動物傳染性海綿狀腦病中，病變可波及小腦顆粒神經(jīng)元，導(dǎo)致小腦皮層的神經(jīng)元環(huán)路受損，從而呈現(xiàn)神經(jīng)性行為失調(diào)。研究小腦顆粒神經(jīng)元在動物傳染性海綿狀腦病病理學(xué)變化中的反應(yīng)、病理發(fā)生的機理特別是分子機理，有賴于小腦顆粒神經(jīng)元細胞模型的建立。小腦顆粒細胞的軸突是沿冠狀軸分布的平行纖維，正是這種排列保證了興奮的單向傳導(dǎo)，這是小腦功能理論中的關(guān)鍵假設(shè)，小腦顆粒細胞通過g-氨基丁酸接受戈爾吉細胞的抑制性突觸的信息傳入。

方法簡介：

實驗室分離的兔小腦顆粒采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的兔小腦顆粒經(jīng)NSE免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
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收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作