白介素27ELISA試劑盒在使用時(shí)需要注意以下事項(xiàng)

　　白介素27ELISA試劑盒是一種用于定量檢測樣本中IL-27濃度的試劑盒，基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。其原理是將特異性抗體包被在微孔板（或酶標(biāo)板）上，加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本，樣本中的IL-27會(huì)與包被抗體結(jié)合。然后加入生物素化抗體，該抗體會(huì)與已結(jié)合的IL-27發(fā)生特異性結(jié)合。接著加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會(huì)發(fā)生高強(qiáng)度的非共價(jià)結(jié)合。最后加入顯色劑底物TMB，若反應(yīng)孔中存在IL-27，則HRP會(huì)使無色TMB變成藍(lán)色物質(zhì)，加入終止液后反應(yīng)孔會(huì)變成黃色。在特定波長下測定反應(yīng)孔的吸光度（OD值），樣本中的IL-27濃度與OD值成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣本中IL-27的濃度。

　　白介素27ELISA試劑盒在使用時(shí)需要注意以下事項(xiàng)：

　　1、試劑準(zhǔn)備與保存

　　平衡試劑：從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)在室溫平衡至少30分鐘，使試劑的溫度與室溫一致，避免因溫度差異影響檢測結(jié)果。未用完的酶標(biāo)包被板開封后應(yīng)裝入密封袋中保存，防止板條受潮或污染。

　　標(biāo)準(zhǔn)品處理：標(biāo)準(zhǔn)品液配制時(shí)，要嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行稀釋，且稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)盡量現(xiàn)配現(xiàn)用，不可保存。

　　試劑混勻：使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品，混勻時(shí)要避免產(chǎn)生過多的泡沫，以免產(chǎn)生加樣上的誤差。

　　試劑保存：不同批號(hào)的試劑不要混用，且要按照說明書規(guī)定的條件保存試劑，通常需要在2-8℃冰箱內(nèi)保存。

　　2、實(shí)驗(yàn)操作過程

　　樣本處理：收集的樣本應(yīng)盡早檢測，若不能馬上檢測，應(yīng)將標(biāo)本放于-20℃保存，但需避免反復(fù)凍融。對于血清、血漿樣本，要注意抗凝劑的選擇，EDTA、檸檬酸鹽、肝素等抗凝劑可用于血漿樣本的檢測，但不同抗凝劑對檢測結(jié)果可能有一定影響，需根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇合適的抗凝劑。

　　加樣：加樣時(shí)要使用一次性吸頭，避免交叉污染。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。每孔加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品的量要準(zhǔn)確，一般為100ul左右。加樣時(shí)要將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不要觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　溫育：反應(yīng)板放入恒溫箱中進(jìn)行溫育時(shí)，要保持溫度恒定，一般為37℃，并按照說明書要求的時(shí)間進(jìn)行溫育，如30分鐘或1小時(shí)等。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　洗滌：洗滌過程很關(guān)鍵，洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。要使用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。如果使用洗板機(jī)，需提前設(shè)置好洗滌次數(shù)和程序，確保每次洗滌都能有效去除殘留液體。

　　顯色：顯色劑要在臨用前配制，且要在避光條件下進(jìn)行顯色反應(yīng)，顯色時(shí)間也需嚴(yán)格控制，一般為15分鐘左右。顯色完成后應(yīng)立即終止反應(yīng)。

　　終止與讀數(shù)：加入終止液后要立即混勻，并在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)（通常為30分鐘內(nèi)）用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。